婴幼儿配方奶粉中蜡样芽孢杆菌污染的分离鉴定分析
摘要：目的 研究婴幼儿配方奶粉中蜡样芽孢杆菌污染的分离鉴定分析。方法 选择2016年9月-2017年9月市场45件婴幼儿配方奶粉，采用稀释培养计数（MPN 计数）法进行蜡样芽孢杆菌菌落计数及确证试验，并对结果进行分析。结果 45件婴幼儿配方奶粉中，共查处5件蜡样芽孢杆菌，其菌落计数结果分别为3.0、3.6、6.1、7.4、15.0 MPN/g。结论 我国目前销售的婴幼儿配方奶粉中仍存在蜡样芽孢杆菌污染，临床需要及时采取有效措施，并加强一定的监督管理，保证婴幼儿配方奶粉的合格，使得我国婴幼儿能够健康成长。
关键词：婴幼儿；配方奶粉；蜡样芽孢杆菌污染；分离鉴定
蜡状芽孢杆菌是一种非胶囊，产孢孢子，属于兼性好氧的革兰氏阳性杆菌。使用蜡样芽孢杆菌污染的食物后可引起呕吐，引起腹泻的肠毒素患者通常在8至16小时内出现呕吐或腹泻，或两者兼有的中毒症状；严重的眼部感染可能发生，甚至出现心内膜炎、脑膜炎[1]。由于该杆菌广泛存在于空气、水中，因此食物等无法避免出现感染。原料奶的污染来源一般有奶牛的粪便、饲料，水和土壤，还包括奶罐和加工场的机械管道[2]。在乳品行业，由蜡样芽孢杆菌引起的食物中毒，容易被误认为是乳糖不耐症使得在临床上被忽视。本文通过研究蜡样芽孢杆菌污染的分离鉴定方式，旨在找出污染源并建立相应的防治措施，现将结果报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择2016年9月-2017年9月市场上45件婴幼儿配方奶粉，均为正常出售且国产的婴幼儿配方奶粉，分别来自国内的10家食品企业，共10个品牌的的奶产品，全部样品均包装完整，且均在有效期内，所有厂家均无不良历史记录。
1.2 方法
所有测试均使用稀释的培养计数（MPN计数）方法进行，其中培养基和试剂：甘露醇卵黄多黏菌素（MYP）瓊脂，胰酪胨大豆多黏菌素肉汤，酪蛋白琼脂，西蒙氏柠檬酸盐培养基，磷酸盐缓冲液，硝酸盐培养基，营养琼脂，糖发酵管，动力培养基，溶菌酶营养肉汤，胰酪胨大豆养血（TSSB）琼脂，明胶培养基等均购自北京陆桥有限责任公司均在有效期内使用，均为正常且可使用。其中蜡样芽孢杆菌菌落计数：选取3个适宜连续稀释度的样品稀释液各1mL并接种于10mL 胰酪胨大豆多黏菌素肉汤中，每一稀释度接种3管，每管接种1mL。于（30±1）℃环境中，并培养48h±2h。使用接种环从每个管中取出一个环，在MYP琼脂平板上划线，并在30±1℃下培养24h±2h。从每个平板挑选至少5个典型或可疑的菌落，在营养琼脂平板上划线纯培养，并于30±1℃培养24h±2h，进行确证试验。
1.3 观察指标
按照GB 4789.14-2014食品卫生微生物学检验，蜡样芽孢杆菌检验，采用 MPN 计数法进行蜡样芽孢杆菌菌落计数及确证试验[3]。
1.4 统计学处理
采用SPSS 18.0统计软件，计量资料用【不支持wmf图片】±s表示，采用t检验，计数资料用百分比表示，采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1所有奶粉的检出情况
2.2 所有奶粉菌落及形态观察
在MYP 琼脂平板上显示，均为微粉红色菌落，周围有白色至淡粉红色沉淀环；在营养琼脂平板上，不透明，表面粗糙似毛玻璃状，颜色为灰白色；在TSSB 平板上菌落颜色为浅灰色，似白色毛玻璃状，不透明，有草绿色溶血环。挑取纯培养的单个菌落，经革兰染色镜检为革兰阳性芽孢杆菌。
3 讨论
乳制品在加工，运输，储存等过程中容易被蜡样芽孢杆菌污染。细菌可通过不卫生的器具，灰尘和员工传播。由蜡样芽孢杆菌引起的大多数早期呕吐性食物中毒是由牛奶和乳制品引起的。这不包括被忽视的乳糖不耐症[4]。由于婴幼儿免疫功能低，其中的几率本身就会高于正常成年人，使得临床需要不断重视配方奶的污染情况。
蜡样芽孢杆菌是需氧革兰氏阳性菌，可形成孢子，易产生食物污染，甚至出现心内膜炎和菌血症等疾病。在乳品工业中由蜡样芽孢杆菌污染生乳是严重的，目前传统的检测方法主要是采用选择性培养基分离培养，生化反应鉴定等方法，但由于耗时费力，无法大规模适应现代食品生产的检验需要[5]。近年来，国内外对于蜡样芽孢杆菌的快速检测开发出多种检验方法，包括蛋白印迹技术检验（Western blotting）、PCR检验。本文通过选取45例国内的婴幼儿配方奶，结果显示共有5件蜡样芽孢杆菌，在不同琼脂平板上显示出不同的情况，提示婴幼儿配方奶粉存在蜡样芽孢杆菌污染，因此，对婴幼儿健康的危害是不容忽视的[6]。相关部门和生产厂商需要采取应对措施，从而降低婴幼儿配方奶粉由于蜡样芽孢杆菌污染所带来的不良事件。
综上所述，由于蜡样芽孢杆菌的芽孢具有很强的抵抗能力和繁殖能力，临床需要在婴幼儿配方奶粉中不断加强监测，增加蜡样芽孢杆菌等条件致病菌指标，保证婴幼儿乳品安全有效控制。
参考文献
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